质检科普

我国对食用合成色素的使用种类、使用范围和使用量都有严格的限制。尽管市场监管部门持续加强对食品中违法添加行为的打击力度，仍有个别不法商家铤而走险，向食品中违法添加非食用工业染料，降低成本提高利润。

干制虾仁作为消费者餐桌上的常客，曾被爆出“染色美容”等新闻。调查发现，给虾仁染色的常用粉末以胭脂红和酸性大红GR为主，其中酸性大红GR由于吸附性强、色泽牢固、价格低廉、获取方便，被不法商家使用，以使虾仁看上去色泽诱人。为打击在食品及食品添加剂生产中违法添加非食用物质的行为，有关部门自2008年以来曾陆续发布六批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》，其中包括苏丹红、碱性嫩黄等多个食品中可能违法添加的工业染料。但由于食品中酸性大红GR一度缺乏专业可靠的检测方法，并不在名单之列，导致监管盲区。

酸性大红GR又称酸性红73，是一种人工合成的偶氮类工业染色剂，主要用于木材、皮革、羊毛蚕丝制品等染色。偶氮类染料大都以苯、甲苯、萘、蒽等化工有毒品经硝化、卤化、酰化等化学反应合成，可通过与人体皮肤、粘膜或呼吸道进入人体并在体内扩散，有诱发肿瘤等恶性疾病风险。作为含苯环的酸性偶氮类化合物，酸性大红GR如果长期被食用会对人体产生毒害作用。违法添加物质的检测重在快速、准确、高效，因此十分有必要建立一种适用性广、易操作、提取效率高且稳定的食品中酸性大红GR的检测方法。本机构在充分市场调研的基础上，参考色素的国标方法、文献报道，结合酸性大红GR染料特点，选取了3类具有代表性的食品辣椒制品、果汁饮料和干制虾仁分别作为试验基质，采用固相萃取-高效液相色谱法对基质中非法添加酸性大红GR进行检测。样品经均质、脱脂，用乙醇氨水溶液提取酸性大红GR，并利用聚酰胺固相萃取柱净化，用反相液相色谱进行定性和定量分析。利用本方法在三类食品基质中分别添加浓度为2.5、5.0、25.0 mg/kg的酸性大红GR标准溶液，平均回收率在80%~101%之间。该方法操作简单、灵敏度高、方法稳定可靠，可以为食品中违法添加酸性大红GR的批量快速筛选提供技术参考。

检测原理：酸性大红GR的分子结构中含有2个磺酸基和1个酚羟基，在酸性或中性环境下，酚羟基和磺酸官能团中的羟基可以与聚酰胺的酰胺羰基形成氢键缔合而产生吸附，也能与基质中可能存在的蛋白质上的羧基产生吸附作用；在碱性环境中，酚羟基由于氢的缺失，导致氢键作用力消失，使得酸性大红GR从聚酰胺填料上解吸附下来。所以，本方法先在碱性环境中使酸性大红GR从基质中充分游离出来，再在酸性环境中使酸性大红GR吸附在聚酰胺柱体（或聚酰胺粉）上并淋洗杂质，最后在碱性环境下将酸性大红GR洗脱下来，以达到提高准确度和灵敏度的目的。液相色谱法检测，根据保留时间进行定性，512 nm处测定吸光度，外标法定量。

样品制备：本方法分别选用了油脂含量较高、糖分含量较高和蛋白含量较高的3类具有代表性的食品作为试验基质。样品脱脂参照GB/T 9695.6-2008《肉制品胭脂红着色剂测定》采用石油醚去除含油脂样品中的脂肪。酸性大红GR为水溶性偶氮染料，含油脂食品在加入水溶性提取液时，易形成油包水结构，影响目标物提取率；同时脱脂也是对样品进行初步净化，可以有效避免SPE净化小柱堵塞和过载。所以对于含油脂样品，必须进行脱脂处理。在聚酰胺固相萃取柱法净化过程中，样品提取液转移至聚酰胺小柱后，使用不同水温冲洗小柱对提取液中杂质如糖、蛋白、脂肪等干扰因素的溶解不同。常温下大分子的糖和蛋白等物质容易造成小柱堵塞，不仅造成目标回收物纯度降低，回收率差别也较大。我们试验了不同水温洗脱小柱对回收率的影响，以虾粉基质为例，结果显示，在3个不同添加浓度，使用60℃水洗，目标物回收率可达85%以上，效果优于常温水洗脱。

提取试剂的选择：酸性大红GR为酸性偶氮染料，根据其溶解性的特点采用乙醇氨水提取。我们试验了5种不同乙醇氨水体积比的溶剂，发现乙醇-氨水-水［（7+2+1）体积比］的提取效果最好。食品中蛋白质由氨基酸组成，每个氨基酸均含有羟基和氨基，在中性或酸性环境下，酸性大红GR会与蛋白质中的氨基酸分子形成吸附。而利用碱性提取液乙醇-氨水-水［（7+2+1）体积比］进行提取，可以使酸性大红GR分子与蛋白质分子解吸附，在提取液中呈充分游离状态，从而达到最佳提取效果。

样品过滤器的选择：样品经溶剂提取浓缩后，可能存在一些残渣或杂质，容易导致液相色谱柱堵塞，影响筛查结果也会损伤仪器，因此需要使用过滤器对样品进行净化。实验室常用的有机相过滤器主要有尼龙和聚四氟乙烯材质。我们考察了尼龙和聚四氟乙烯过滤器对目标化合物的吸附作用。结果表明，在3种基质中，尼龙过滤器对酸性大红GR均具有较强的吸附作用，吸附率在60.0～100%之间，且浓度越低，吸附率越高；聚四氟乙烯过滤器对酸性大红GR的吸附率在0～0.5%之间，对检测结果基本没有影响。因此采用聚四氟乙烯过滤器对待上机溶液进行净化。

本研究采用液相色谱法对多种食品基质中的酸性大红GR进行分离。建立了水产干制品、辣椒制品和饮料中酸性大红GR的高效液相色谱分析方法。方法学考察表明，该方法具有良好的准确度和精密度，特异性试验结果显示，目标化合物在保留时间处无其他常见酸性偶氮类染料化合物干扰。该方法操作简单、灵敏度高、方法稳定可靠且易于推广，可用于相关食品中酸性大红GR违法添加的风险监测，满足日常高通量检测需求。

□江苏省食品药品监督检验研究院 高惠敏